pecy7选择哪个通道,pe-cy7与apc同样的光吗

互联网 2024-04-10 阅读

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pe-cy7 是什么,流式细胞仪

PE-Cy7是一种复合荧光素。由PE和Cy7这两种荧光素通过共价结合在一起。

荧光素在受到适当波长的光线照射时,会释放出波长比照射光长的光,这个现象叫做荧光。激发光和释放光波长的差异是每种荧光素的分子特性所决定的。

PE的最佳激发光在560纳米,而最强释放光在570纳米左右。而合成PE-cy7后,由于两个分子的距离很小,释放光还没有离开,就又Cy7这个分子吸收,成为Cy7的激发光,Cy7的释放光波长最强处为770纳米。这样大大增加了激发光和释放光波长的差别。给检测提供了更灵活的选择方案。

PE-Cy7荧光断裂怎么办

你用胶带缠一下。

因为笔头裂开的话呢,你只要用胶带缠起来,他就可以继续使用了,当然也可以用胶水把它粘起来,反正都很简单的,不管你用胶带也好,用胶水也好,都是可以把它弄好的只是说交代的话呢比较简单一点,你只要把它撕开粘起来就行了,不用胶水,不小心的话会粘到手,APC(别藻青蛋白):红色660nm选择好荧光染料以后,就是将这些染料与你的抗体起来,这就要根据自己实验的需要了,有些常用的抗体上可能标记有很多种染料,但有些不常用的选择性就不太多,所以可以先定一些无法选择的抗体,然后就是根据表达量少的标记荧光信号强的染料,认为重要的抗体标记荧光信号强的,常用荧光的强弱如下:PE>APC>PE-CY7>Percy-cy5.5>FITC>APC-CY7

pe-cy7与apc同样的光吗

现在的机器都是自动调节,不过也要做好准备工作。我大致说一下原理。做补偿调节,需要以下的样本,无任何染色的样本,分别是FITC,PE,PerCP还有APC单染阳性的样本,所以你这里需要一共5个管子。在纯手工的年代,你需要画出这四个颜色两两配对的散点图,比如FITC-PE,FITC-PerCP,FITC-APC,PE-PerCP,PE-APC,PerCP-APC,这一共6个散点图。然后,先上未染色的样本,调节各个荧光通道的电压,是细胞都位于各个散点图的左下角。在记录前,把每个样本都先跑一边,目的是观察电压的设置是否正确。比如FITC和PE会有重叠,上FITC阳性管的时候,虽然其他通道会有些信号,但FITC通道的信号应该最强。如果发生了其他通道信号强于目的通道的情况,就要进一步调节电压,是目的通道的信号最强。这样把每一个单染的样本都过一遍,确保目的通道的信号最强。现在的仪器软件,不需要你自己画这些散点图,但是调剂电压的这一步是必须的,可以在阴性对照管的页面下完成。电压调节好以后,记录阴性对照和阳性单染样本的信号,然后机器会自动结算补偿值。如果你要手工计算,这里是原则:以FITC-PE为例。在散点图上,划分为四个象限。如果纵坐标是FITC,横坐标是PE。调节电压后,阴性的细胞位于左下象限。这是可以得出阴性细胞横坐标(PE)和纵坐标(FITC)的平均荧光强度值。电压调好以后,上单色阳性样本。比如上牌FITC阳性,这时不要再改变电压了,而是调节补偿系数,最终目的就是让FITC阳性的细胞都位于向下象限,并且该细胞团的纵坐标(PE)荧光强度和阴性细胞团的值一致。其他颜色的两两补偿以此类推。

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